Methylmalonic Acid in SeraFlx BIOMATRIX on Force C18 by LC-MS/MS
Peaks
tR (min)
Precursor Ion
Product Ion
1.
Succinic acid
1.69
117.3
73.1
2.
Methyl-D3-malonic acid
2.02
120.2
76.2
3.
Methylmalonic acid
2.03
117.3
73.1
LC_CF0717
Column
Force C18 (cat.# 963431E)
Dimensions:
100 mm x 3.0 mm ID
Particle Size:
3 µm
Pore Size:
100 Å
Guard Column:
Force C18 EXP guard column cartridge 3 mm ID, (cat.# 963450253)
Temp.:
35 °C
Sample
Conc.:
50 ng/mL methylmalonic acid in SeraFlx BIOMATRIX
Inj. Vol.:
3 µL
Mobile Phase
A:
0.5% Formic acid in water
B:
0.5% Formic acid in methanol
Time (min)
Flow (mL/min)
%A
%B
0.00
0.7
95
5
0.50
0.7
95
5
3.00
0.7
5
95
3.01
0.7
95
5
5.00
0.7
95
5
Detector
MS/MS
Ion Mode:
ESI-
Mode:
MRM
Instrument
HPLC
Notes
100 μL of sample (SeraFlx BIOMATRIX) was aliquoted for extraction. The sample was fortified at 50 ng/mL with methylmalonic acid. It was also fortified with 5 μL of succinic acid (20 μg/mL in water, for validation purposes only). 5 μL of the internal standard (2,500 ng/mL MMA-D3 in water) was added to the sample. The sample was precipitated using 300 μL of 0.5% formic acid in methanol followed by a 10 second vortex at 3,000 rpm. The sample was then centrifuged at 4,000 rpm for 10 minutes at 10 °C. 250 μL of the supernatant was filtered using a Thomson SINGLE StEP standard filter vial (PVDF, 0.2 μm, Restek cat.# 25895) prior to analysis.
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